H5N1亚型禽流感病毒NSl蛋白表达影响因素分析

目的 优化高表达禽流感病毒NS1蛋白的实验方法。方法将基因工程菌接种LB培养基，设定IPTG终浓度为0.3mmol／L，诱导温度为37℃，诱导表达6．0h，SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况，确定最佳诱导时间。以o．1mm01／L为梯度，设置不同IPTG诱导浓度，37℃诱导4.0h，分析融合蛋白表达，确定最佳IPTG诱导浓度。设定IPTG至终浓度为0。6mmo1／L，分别于24℃、28℃、32℃、37℃和42℃下诱导表达4．0h，分析融合蛋白表达，确定最适诱导温度。采用最优表达条件，超声裂菌后SDS-PAGE分析融合蛋白，Westernblotting对融合蛋白进行鉴定。结果当培养温度为37℃，IPTG浓度为0。3mmol／L时，融合蛋白GST-NSl在IPTG诱导5．0h时的表达量最高，达28．5％；当IPTG诱导浓度为0。6ram01／L，在37℃诱导表达4。0h时，融合蛋白的表达量可达27．9％。选用优化的表达条件，IPTG0．6mmo1／L，37℃诱导表达4．0h，融合蛋白的表达量最高可达33．2％。进一步分析显示，融合蛋白大部分以可溶形式表达，其表达量可占菌体总蛋白的25．1％。经SDS-PAGE电泳、电转移后，用小鼠抗GST单克隆抗体进行免疫印迹分析，出现一条阳性反应带。结论通过实验优化了工程菌诱导表达的最佳IPTG浓度、最适时间和培养温度，实现了融合蛋白的可溶性高表达。