| 酵母双杂交系统筛选GATA-1相互作用蛋白质及功能验证 |
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| 引用本文： | 冯志伟,李长燕,陈慧,金超智,唐刘君,张卜兮,原艳芝,詹轶群,王建,杨晓明. 酵母双杂交系统筛选GATA-1相互作用蛋白质及功能验证[J]. 医学分子生物学杂志, 2010, 7(3). DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.03.001 |
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| 作者姓名： | 冯志伟 李长燕 陈慧 金超智 唐刘君 张卜兮 原艳芝 詹轶群 王建 杨晓明 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850;军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市,100850 |
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| 摘 要： | 目的 利用酵母双杂交技术从人脑cDNA文库中筛选与人GATA-1相互作用的蛋白质.方法 从人K562细胞中扩增出全长GATA1基因,设计引物将其3段截断体亚克隆入酵母表达载体pDBLeu中,转化至AH109感受态酵母中,利用酵母双杂交技术筛选人脑cDNA文库中与其相互作用的蛋白质,阳性克隆通过回转及免疫共沉淀试验进行验证,利用3xGATA荧光素酶报告基因对相互作用蛋白质进行功能验证.结果 成功构建出酵母诱饵蛋白表达质粒pDBLeu-GATA1(1),pDBLeu-GATA1(2),pDBLeu-GATA1(3),筛到34个阳性克隆,用生物信息学分析及回转验证得到5个与GATA-1相互作用的候选蛋白,通过免疫共沉淀试验进一步验证,获得3个蛋白质能与GATA-1相互作用,分别是ECSIT,EFEMP1和GPS2.荧光素酶试验表明这3个蛋白质均能对GATA1的转录活性产生影响,证实它们之间的相互作用具有影响GATA1转录的功能.结论 应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀试验,从人脑cDNA文库中成功获得3个与GATA-1相互作用并对其转录活性具有调节作用的蛋白质,为研究GATA1蛋白质的功能提供了新的线索.
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| 关 键 词： | GATA-1 酵母双杂交 蛋白质相互作用 免疫共沉淀 荧光素酶试验 |
Screening and Identification of GATA-1 Interacting Proteins by Use of Yeast Two-Hybrid System |
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| FENG Zhiwei,LI Changyan,CHEN Hui,JIN Chaozhi,TANG Liujun,ZHANG Boxi,YUAN Yanzhi,ZHAN Yiqun,WANG Jian,YANG Xiaoming. Screening and Identification of GATA-1 Interacting Proteins by Use of Yeast Two-Hybrid System[J]. Journal of Medical Molecular Biology, 2010, 7(3). DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.03.001 |
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| Authors: | FENG Zhiwei LI Changyan CHEN Hui JIN Chaozhi TANG Liujun ZHANG Boxi YUAN Yanzhi ZHAN Yiqun WANG Jian YANG Xiaoming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GATA-1 |
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