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体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定
引用本文:孔桂美,张小荣,刁亚利,吴克艳,刘秋云,卜平. 体外重组表达血管生长因子VEGF165单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2011, 27(10): 1098-1102
作者姓名:孔桂美  张小荣  刁亚利  吴克艳  刘秋云  卜平
作者单位:1. 扬州大学医学院中医系中西医结合临床教研室,江苏扬州,225001
2. 扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏扬州,225009
3. 扬州大学医学院附属第二医院胸心外科,江苏扬州,225001
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30801497); 扬州大学研究生创新基金资助项目(2008)
摘    要:目的:研制人VEGF165单克隆抗体(mAb),为研究VEGF165的生物学活性提供基础.方法:应用RT-PCR从脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF165基因,克隆人原核表达载体pGEX-6P1中获得重组表达载体pGEX-6P1 -VEGF165,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得重组人VEGF165蛋白,将重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,制备人VEGF165高效价的mAb.通过鸡胚血管形成抑制实验、HUVEC迁移抑制实验以及HUVEC血管形成抑制实验,对获得的人VEGF165特异性mAb进行进一步鉴定.结果:成功地从脐静脉血管内皮细胞中克隆出人VEGF165基因,并在大肠杆菌表达系统中获得高效表达,以纯化重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,筛选获得5株分泌人VEGF165特异性mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为5A6、3F5、6H3、7D10、7A10,其中5A6、3F5、6H3、7D10分泌的mAb亚类为IgG2a,7A10分泌的mAb亚类为IgG2b,抗体轻链均为κ链.5株mAb均能抑制鸡胚血管形成、抑制HUVEC迁移和及血管形成.结论:所获得的mAb具有效价高,活性强的优点,为抗肿瘤血管研究中进一步研究VEGF165的生物学作用提供了重要的基础.

关 键 词:人VEGF165  单克隆抗体  HUVEC  血管形成  细胞迁移

Monoclonal antibody preparation and identification of vascular endothelial growth factor 165 expressed in vitro
Kong Gui-mei,Zhang Xiao-rong,Diao Ya-li,Wu Ke-yan,Liu Qiu-yun,Bo Ping. Monoclonal antibody preparation and identification of vascular endothelial growth factor 165 expressed in vitro[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2011, 27(10): 1098-1102
Authors:Kong Gui-mei  Zhang Xiao-rong  Diao Ya-li  Wu Ke-yan  Liu Qiu-yun  Bo Ping
Affiliation:Department of Traditional Chinese Medicine, Medical School of Yangzhou University, Yangzhou, China. gmkong@yzu.edu.cn
Abstract:AIM: To prepare a monoclonal antibody against human vascular endothelial growth factor (VEGF165), for further study the VEGF165 in the tumorigenesis, tumor cell migration and the tumor cells escape from the immune response. METHODS: VEGF165 gene was cloned from the human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) by RT-PCR, and then cloned into the pGEX-6P1, constructed the prokaryotic expression of pGEX-6P1-VEGF165. The fusion -protein of VEGF165 was expressed in E.coli (BL21) induced by the 1.0 mmol/L IPTG ...
Keywords:human VEGF165  monoclonal antibody  HUVEC  angiogenesis  cell migration  
本文献已被 CNKI 万方数据 PubMed 等数据库收录!
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