| 小鼠IL-1α多克隆抗体的制备及应用 |
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| 引用本文： | 林丹丹,刘春亮,包光明,吴康,单琳,刘海燕.小鼠IL-1α多克隆抗体的制备及应用[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(9). |
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| 作者姓名： | 林丹丹 刘春亮 包光明 吴康 单琳 刘海燕 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学医学部,肿瘤细胞与分子免疫实验室,江苏苏州215121
2. 苏州大学医学部,生物化学与分子生物学教研室,江苏苏州215121 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重大研究计划培育项目(91029703) |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠白细胞介素-1α原核表达载体,表达并纯化IL-1α蛋白,制备兔抗鼠IL-1α多克隆抗体,并对抗体特性进行初步的鉴定.方法:利用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠脾脏cDNA中扩增出IL-1α的全长基因,酶切后连接至pET32a(+)原核表达载体,重组载体测序正确后转化至BL21( DE3)大肠杆菌.利用蛋白质原核表达自动诱导方案成功表达重组蛋白.重组蛋白经电洗脱纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得了抗小鼠IL-1α的多克隆抗体,ELISA检测抗体效价.Western blot和流式细胞术(FCM)检测抗血清的特异性.结果:成功构建了重组表达载体pET32a(+)-IL-1α,表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,得到的多克隆抗体ELISA显示抗体效价可达1∶25 600.Western blot和FCM分析该抗体能特异性结合IL-1α.结论:利用重组的IL-1α蛋白成功制备了高效价、高特异性的兔抗IL-1α抗体,为进一步研究IL-1α的生物学功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | IL-1α 基因克隆 原核表达 多克隆抗体 |
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