| 大鼠Neurogenesin-1基因真核表达载体的构建及在cos-7细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 高维陆,尹宗生,张胜权,张辉.大鼠Neurogenesin-1基因真核表达载体的构建及在cos-7细胞中的表达[J].安徽医科大学学报,2009,44(4). |
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| 作者姓名： | 高维陆 尹宗生 张胜权 张辉 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学第一附属医院骨科,合肥,230022;安徽医科大学分子生物学教研室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 克隆大鼠海马中Neurogenesin-1(Ng1)基因片段,构建pSecTag2/Hygro B-Ng1真核表达载体,并检测其在cos-7细胞中的表达,为进一步研究该基因对脊髓神经干细胞分化的影响提供实验依据.方法 在无RNA酶污染的条件下提取出大鼠海马总RNA.利用逆转录聚合酶链反应扩增出Ng1基因片段.将该基因片段连接到真核表达载体pSecTag2/Hygro B,聚合酶链反应初步筛选,双酶切鉴定后送测序.将构建成功的重组真核表达载体转染入cos-7细胞,Western blot鉴定重组Ng1蛋白的表达. 结果 逆转录聚合酶链反应成功获得大鼠Ng1 cDNA.随机挑选10个重组真核表达载体的克隆,聚合酶链反应筛选出阳性克隆2个,经双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组质粒构建成功.脂质体介导转染cos-7细胞48 h后,Western blot鉴定重组Ng1蛋白在cos-7细胞中的表达,在46 ku处出现阳性条带. 结论 大鼠海马Ng1基因的真核表达载体pSecTag2/Hygro B-Ng1构建成功,转染cos-7细胞后能够表达重组Ng1蛋白.
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| 关 键 词： | 大鼠 基因表达 遗传载体 |
Construction of eukaryotic expression vector of rat Neurogenesin-1 gene and its expression in cos-7 cell |
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