| 反向重复序列法构建神经病靶标酯酶RNA干涉表达质粒 |
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| 引用本文： | 常平安,伍一军. 反向重复序列法构建神经病靶标酯酶RNA干涉表达质粒[J]. 毒理学杂志, 2007, 21(1): 4-8 |
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| 作者姓名： | 常平安 伍一军 |
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| 作者单位： | 重庆邮电学院生物信息学院，中国科学院动物研究所 重庆400065 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;重庆市自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体。方法在正义和反义引物两端分别加上EcoRⅠ和BamHⅠ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鉴定重组载体。脂质体法转染到Hela细胞中瞬时表达重组载体,酶活力测定其对细胞内神经病靶标酯酶活力的影响。结果成功构建了NTE双链RNA稳定表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,表达该载体细胞内NTE活力明显下降至对照细胞的20%左右。结论采用反向重复序列法将靶标基因的编码序列正反向插入到通用真核细胞表达载体中,是构建哺乳细胞基因双链RNA稳定表达载体的有效方法。
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| 关 键 词： | 神经病靶标酯酶 RNA干涉 表达载体 反向重复序列 |
| 文章编号： | 1002-3127（2007）01-0004-05 |
| 收稿时间： | 2006-11-20 |
| 修稿时间： | 2006-11-20 |
Construction of RNA interference expression plasmid of human neuropathy target esterase by cloning reverse repeats into plasmid DNA |
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| CHANG Ping-an,WU Yi-jun. Construction of RNA interference expression plasmid of human neuropathy target esterase by cloning reverse repeats into plasmid DNA[J]. Journal of Toxicology, 2007, 21(1): 4-8 |
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| Authors: | CHANG Ping-an WU Yi-jun |
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| Affiliation: | 1. College of bio-information, Chongqing University of Posts and Telecommunications, Chongqing 400065,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Neuropathy target esterase RNA interference Expressing vector Inverted DNA repeats |
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