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| 人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用 | |
| 引用本文： | 海国栋,赵国强,赵明耀. 人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用[J]. 中国临床实用医学, 2007, 1(4) |
| 作者姓名： | 海国栋 赵国强 赵明耀 |
| 作者单位： | 1. 450052,河南省郑州市骨科医院 2. 郑州大学基础医学院微免教研室 3. 郑州大学基础医学院病生教研室 |
| 摘 要： | 目的本实验拟构建针对mta1 mRNA的siRNA重组载体,将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内,位于H1启动子下游,转染入人骨肉瘤细胞内,在细胞内表达mta1靶向的siRNA分子,特异性沉默mta1的表达。方法依据GenBank中mta1基因(NM-004689)的序列,用设计分析软件进行设计候选序列,确定针对mta1的siRNA序列。合成mta1发卡样siRNA寡核苷酸,退火成双链DNA,克隆入T载体,利用α互补和T7/SP6PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-mta1;用BglⅡ和HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-mta1和siRNA表达载体pSuperneo;将双粘mta1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表达载体pSuperneo中;利用BglⅡ和HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-mta1;对插入序列进行DNA序列分析。将siRNA表达载体pSuperneo-mta1转入人骨肉瘤细胞系MG-63中,用RT-PCR方法检测细胞mta1 mRNA表达水平。结果转染pSuperneo-mta1的实验组骨肉瘤细胞中mta1 mRNA表达几乎完全被抑制,而2个对照组(无关siRNA对照组和空载体对照组)和未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高水平的mta1 mRNA表达。结论设计出针对mta1的发卡样siRNA寡核苷酸片段,成功构建出针对mta1的siRNA表达载体pSuperneo-mta1,pSuperneo-mta1转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞mta1 mRNA表达。 |
| 关 键 词： | mta1 RNA干扰 基因沉默 骨肉瘤 |
Human osteosarcoma vector construction and silencing effect of mta1 gene targeted small interfering RAN |
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| HAI Guo-dong,ZHAO Guo-qiang,ZHAO Ming-yao. Human osteosarcoma vector construction and silencing effect of mta1 gene targeted small interfering RAN[J]. China Clinical Practical Medicine, 2007, 1(4) | |
| Authors: | HAI Guo-dong ZHAO Guo-qiang ZHAO Ming-yao |
| Abstract: | |
| Keywords: | Mta1 RNAi Gene silencing Osteosarcoma |
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