| 靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的慢病毒载体对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响 |
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| 引用本文： | 邱志兵,陈鑫,薛昊,许欢,徐明,蒋英硕,汪黎明,肖立琼.靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的慢病毒载体对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响[J].中华实验外科杂志,2012,29(4). |
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| 作者姓名： | 邱志兵 陈鑫 薛昊 许欢 徐明 蒋英硕 汪黎明 肖立琼 |
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| 作者单位： | 210006,南京医科大学附属南京第一医院 南京市心血管病医院心胸外科 |
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| 基金项目： | "十二五"江苏省医学重点人才课题，南京市医学科技发展计划资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建大鼠骨桥蛋白(OPN)基因的shRNA慢病毒表达载体,并观察其对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响.方法 针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到慢病毒载体PLKO.1中,构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO.1-OPN-shRNA,检测并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体.并将其转染大鼠血管平滑肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMCs OPN mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VSMC OPN蛋白表达水平；噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的影响.结果 靶向OPN慢病毒表达载体构建成功.重组慢病毒载体PLKO.1-OPN-shRNA转染后可显著抑制VSMCs的OPN mRNA及蛋白的表达水平,OPN蛋白表达明显下降,其中以PLKO.1-OPN2-shRNA最为明显,达到90％以上；转染PLKO.1-OPN2-shRNA后72 h的细胞增殖能力吸光度(A)值=0.365 ±0.011]明显低于未处理组(A值=0.941±0.028)和阴性对照组细胞(A值=0.941±0.040,P＜0.05)；而早期细胞凋亡率(20.44±2.69)％和晚期细胞凋亡率(16.79±1.01)％均明显高于未转染组和阴性对照组(P＜0.01).结论 成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向OPN慢病毒表达载体PLKO.1-OPN2-shRNA,该载体能有效抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖,并促进细胞凋亡.
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| 关 键 词： | 骨桥蛋白 血管平滑肌细胞 血管再狭窄 RNA干扰 慢病毒 |
Effects of osteopontin RNA interference on proliferation and apoptosis of rat vascular smooth muscle Cells |
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| QIU Zhi-bing
,
CHEN Xin
,
XUE Hao
,
XU Huan
,
XU Ming
,
JIANG Ying-shuo
,
WANG Li-ming
,
XIAO Li-qiong.Effects of osteopontin RNA interference on proliferation and apoptosis of rat vascular smooth muscle Cells[J].Chinese Journal of Experimental Surgery,2012,29(4). |
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| Authors: | QIU Zhi-bing CHEN Xin XUE Hao XU Huan XU Ming JIANG Ying-shuo WANG Li-ming XIAO Li-qiong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Osteopontin Vascular smooth muscle cells Vascular restenosis RNA interference Lentivirus |
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