siRNA沉默PPARγ基因对大鼠心肌细胞缺血再灌注致胰岛素抵抗现象的影响

目的 观察小干扰RNA（siRNA）沉默过氧化物酶体增殖物激活受体基因（PPARγ）的表达对成年大鼠缺血再灌注损伤（IRI）心肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法 培养成年大鼠心肌细胞，构建沉默大鼠心肌细胞PPARγ基因特异siRNA，以脂质体介导转染离体培养的大鼠心肌细胞。制备心肌细胞IRI模型。采用RT-PCR检测PPARγ和葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4） mRNA表达，Western blot检测PPARγ蛋白表达；同位素示踪法检测细胞葡萄糖（Glu）摄取率变化。结果 IRI模型组心肌细胞PPARγ mRNA及蛋白表达较空白组不同程度增加（P均<0.05）；siRNA-PPARγ组，PPARγ mRNA及蛋白表达量较空载体组和IRI模型组明显下降（P<0.01），空载体组PPARγ mRNA及蛋白表达接近IRI模型组水平；GLUT-4 mRNA表达量空白组各时间点无明显差别，IRI模型组0 min表达量明显降低，之后随着再灌注时间增加逐渐恢复至空白组水平，空载体组GLUT-4 mRNA表达与IRI模型组无明显差别；沉默PPARγ后，细胞GLUT-4 mRNA表达较IRI模型组和空载体组减低更明显（P<0.05），恢复较IRI模型组更慢。在胰岛素刺激下，与IRI模型组比较，siRNA-PPARγ组各时间点Glu摄取率均降低（P<0.05），0 min下降49.78%，15 min、1 h 、2 h分别降低38.94%、18.61%、11.54%，6 h开始恢复至IRI模型组水平。空载体组与模型组比较Glu摄取率无明显差异。结论 沉默PPARγ的表达，可加重IRI心肌细胞胰岛素抵抗，其可能的机制是PPARγ基因沉默导致的GLUT-4 mRNA表达下降或转位障碍。