MEK抑制剂在K-RAS基因突变的结直肠癌细胞中的耐药机制

目的探讨丝裂原激活蛋白激酶的激酶（MEK）抑制剂曲美替尼（Trametinib）在v-Ki-ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物（K-RAS）基因突变的结直肠癌（CRC）细胞中的耐药机制。方法用Trametinib处理K-RAS基因突变型CRC细胞株LS174T、DLD-1、HCT116，Westernblot法检测STAT3上游蛋白JAK2、JAK3和Src等是否激活。用Trametinib、JAK2/STAT3抑制剂鲁索替尼（Ruxolitinib）/LY5或者两者联用处理HCT116细胞，Westernblot法检测p-STAT3Y705、STAT3、p-ERK1/2表达，磺酰罗丹明B蛋白染色实验观察细胞增殖情况。用Trametinib、LY5或Trametinib+LY5处理HCT116、DLD-1细胞，细胞迁移划痕实验观察细胞迁移情况，MTT实验检测细胞生存率。结果Trametinib能明显抑制ERK1/2的磷酸化，同时也能诱导p－STAT3Y705增加，诱导STAT3上游激酶p-JAK2高表达。Trametinib+Ruxolitinib/LY5联合用药，可同时阻断K-RAS基因突变的CRC细胞p－STAT3Y705、p-ERK1/2的激活，协同抑制肿瘤细胞的生长；可明显抑制肿瘤细胞克隆形成，减弱肿瘤细胞增殖能力；可抑制肿瘤细胞迁移能力，效果明显优于单药组（均P＜0.05）；可抑制细胞增殖，细胞生存率明显低于单药组（均P＜0.05）。结论MEK和STAT3信号通路双重抑制的联合用药方案，是CRC治疗方案的新研究方向。