乌梢蛇实时荧光定量PCR法的建立及与普通PCR鉴别方法的比较研究

目的 为了进一步优化乌梢蛇药材鉴别的准确性，提高鉴别速度。方法 基于CO1片段序列特征，该研究设计了乌梢蛇的特异性引物、探针，通过条件的优化建立了乌梢蛇的实时荧光定量PCR 快速鉴别方法。结果 利用该方法对正品及伪品15个物种30份样本进行了验证，结果全部8 份乌梢蛇正品均能从30 个药材样本中准确地鉴别出来。结论  该方法与药典方法比较，准确性一致，但所用设备少、检测所需要时间短，仅需40 min至1 h即可得出结果，而药典方法需要4 h左右；灵敏度高，检测限可达到1×10-3ng/反应，检测结果在0.001%~100%范围内具有良好的线性关系，相关系数R²=1，而药典方法仅为1×10-2ng/反应。该方法具有特异性强、检测速度快、灵敏度高、所需设备少的特点，适用于乌梢蛇中药材及其饮片真伪快速检测。