全蝎-土鳖虫药对抑制NF-κB信号通路减轻胶原诱导关节炎小鼠骨破坏研究

目的 研究全蝎-土鳖虫药对减轻胶原诱导的关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）模型小鼠关节骨破坏的作用以及对破骨细胞分化的核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信号通路的影响，探讨全蝎-土鳖虫药对治疗类风湿关节炎的机制。方法 DBA/1J小鼠随机分为正常组、模型组及全蝎-土鳖虫低、高剂量组和甲氨蝶呤组。除正常组外，其余组建立CIA模型，正常组和模型组ig纯净水，其余各组给药干预4周。测定各组小鼠足趾肿胀情况；采用Micro-CT扫描的方法重建小鼠关节3D图并分析相关骨参数；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠踝关节病理变化；抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）染色检测关节中破骨细胞分化情况。体外实验考察全蝎-土鳖虫药对对核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL）处理的小鼠骨髓来源的巨噬细胞诱导破骨细胞的影响；免疫荧光染色检测NF-κB p65核定位情况。Western blotting检测破骨细胞分化、CIA小鼠骨组织中NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 各给药组显著降低CIA模型小鼠足趾肿胀（P＜0.05、0.01）；与模型组比较，Micro-CT 3D重建结果表明，全蝎-土鳖虫药对明显抑制CIA模型小鼠骨破坏，保留小鼠骨结构完整性，显著改善骨参数（P＜0.05、0.01）；全蝎-土鳖虫药对显著减少关节TRAP染色阳性细胞数量（P＜0.01）；全蝎-土鳖虫药对高剂量组显著降低CIA小鼠骨组织中NF-κB p65磷酸化水平（P＜0.01）。体外实验结果显示，全蝎-土鳖虫药对显著抑制破骨细胞的分化（P＜0.01），抑制NF-κB p65核定位；与RANKL对照组比较，全蝎-土鳖虫药对组p65、核因子-κBα抑制蛋白（inhibitor of nuclear factor-κB alpha，IκBα）磷酸化水平明显降低（P＜0.05、0.01）。结论 全蝎-土鳖虫药对能够减轻CIA小鼠骨破坏，可能是通过抑制NF-κB信号通路活化、降低破骨细胞的分化而发挥作用。