| 共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 邵月婷,刘亚男,邵晨,汲坤,李晓洁,李峰,张灵,赵丹,李扬,徐德启,胡嘉弟,赵雪俭.共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达[J].吉林大学学报(医学版),2010,36(1):30-34. |
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| 作者姓名： | 邵月婷 刘亚男 邵晨 汲坤 李晓洁 李峰 张灵 赵丹 李扬 徐德启 胡嘉弟 赵雪俭 |
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| 作者单位： | 吉林大学基础医学院病理生理学教研室,吉林长春,130021;美国食品药品监督管理局,马里兰州,Bethesda,20892;美国马里兰大学医学院,马里兰州Baltimore,21201 |
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| 基金项目： | 教育部博士学科专项基金资助课题(20070183012);;吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(200705360) |
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| 摘 要： | 目的：构建可同时表达野生型p53 (wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法：利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞，半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对mdm2和p53表达的影响，MTT法检测共表达质粒转染后PC-3细胞增殖活性。结果：克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-mdm2序列，经DNA测序证实序列正确，通过连接成功构建上述真核重组表达载体；转染细胞48 h后可见siRNA-mdm2组GFP明显表达； RT-PCR和Western blotting检测显示转染共表达质粒后PC-3细胞中 wt-p53表达增强，mdm2表达下调；MTT检测显示共表达质粒转染后PC-3细胞生长抑制率为40.4%。结论：成功构建p53与siRNA-mdm2共表达质粒，共表达质粒可抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖。
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| 关 键 词： | 基因 p53 mdm2基因 RNA干扰 前列腺肿瘤 质粒 |
| 收稿时间： | 2009-08-16 |
Construction of vectors encoding both wide type p53 protein and siRNA-mdm2 and their expressions in PC-3 cells |
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| SHAO Yue-ting,LIU Ya-nan,SHAO Chen,JI Kun,LI Xiao-jie,LI Feng,ZHANG Ling,ZHAO Dan,LI Yang,XU De-qi,HU Jia-di,ZHAO Xue-jian.Construction of vectors encoding both wide type p53 protein and siRNA-mdm2 and their expressions in PC-3 cells[J].Journal of Jilin University: Med Ed,2010,36(1):30-34. |
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| Authors: | SHAO Yue-ting LIU Ya-nan SHAO Chen JI Kun LI Xiao-jie LI Feng ZHANG Ling ZHAO Dan LI Yang XU De-qi HU Jia-di ZHAO Xue-jian |
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| Institution: | 1.Department of Pathophyisiology,School of Basic Medical Sciences,Jilin Univer
sity,Changchun 130021,China;2. Food and Drug Administration,Bethesda 20892,USA;3. School of Medicine,University of Maryland,Baltimore 21201,USA) |
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| Abstract: | Objective To construct the recombinant vectors that coexpress wild type p53(wt-p53) and siRNA-mdm2 for gene therapy in androgen independent prostate cancer.Methods The subcloning,T-Acloning,and PCR technique were used to construct the recombinant vectors,named pcDNA3.1-p53,siRNA-mdm2,p53/siRNA-mdm2,and siRNA-scramble.The recombinant expression vectors mentioned above were transfected into PC-3 cells,the expression levels of the mdm2 siRNA and p53 after transfection were detected by the semi-quantitative RT-... |
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| Keywords: | genes p53 mdm2 gene RNA interference prostate cancer plasmids |
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