γ射线引起HLA—B8表达缺失黑色素瘤细胞株的克隆研究

用７００ｒａｄγ射线照射ＨＬＡ－Ｂ８＋黑色素瘤细胞，于照射后第３天用抗ＨＬＡ－Ｂ８ＩｇＭ型单抗及补体做免疫选择。存活细胞培养１ｗ后，进行第２次免疫选择。存活细胞继续培养１ｗ，然后用有限稀释法在９６孔平底细胞培养板内进行克隆。从５×１０６个受诱变的细胞中共获得６个细胞克隆，其中１个克隆经流式细胞仪表型分析显示ＨＬＡ－Ｂ８无表达，此细胞的ＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ电泳分析表明ＨＬＡ－Ｂ各亚型基因的总表达量减弱，提示克隆到ＨＬＡ－Ｂ８表达缺失的突变株。本研究方法的建立及此突变株的获得，为进一步制备广谱型黑色素瘤“瘤苗”以及研究ＨＬＡｃｌａｓｓⅠ各亚型分子在肿瘤免疫中的作用提供了有力工具。