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| 人resistin基因原核表达载体构建和表达 | |
| 引用本文： | 何祥梁,何东华,黎锋,杨川,程桦,傅祖植.人resistin基因原核表达载体构建和表达[J].中山大学学报(医学科学版),2004,25(5):413-416. |
| 作者姓名： | 何祥梁 何东华 黎锋 杨川 程桦 傅祖植 |
| 作者单位： | 1. 中山大学,附属第一医院急诊科,广东,广州,510080 2. 中山大学,达安基因公司,广东,广州,510080 3. 中山大学,附属第二医院内分泌科,广东,广州,510080 |
| 摘 要： | 目的]构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础.方法]酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒.重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1 mmol/LIPTG在32℃诱导表达2 h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达.结果]RT-PCR扩增产物分子大小为327 bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区.PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段.重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327 bp、4 980 bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5 kD的融合蛋白.结论]成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础. |
| 关 键 词： | 2型糖尿病 胰岛素抵抗 基因克隆 基因表达 |
| 文章编号： | 1672-3554(2004)05-0413-04 |
| 修稿时间： | 2003年6月18日 |
Construction and Expression of A Prokaryotic Expression Vector Containing Human Resistin Gene |
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| HE Xiang-liang,HE Dong-hua,LI Feng,YANG Chuan,CHENG Hua,FU Zu-zhi.Construction and Expression of A Prokaryotic Expression Vector Containing Human Resistin Gene[J].Journal of Sun Yatsen University(Medical Sciences),2004,25(5):413-416. | |
| Authors: | HE Xiang-liang HE Dong-hua LI Feng YANG Chuan CHENG Hua FU Zu-zhi |
| Institution: | HE Xiang-liang1,HE Dong-hua2,LI Feng3,YANG Chuan3,CHENG Hua3,FU Zu-zhi 3 |
| Abstract: | |
| Keywords: | resistin |
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