| AAV-hVEGF165及AAV-TGFβ1转染兔椎间盘纤维环细胞的实验研究 |
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| 引用本文： | 董跃福,胡有谷,王德春.AAV-hVEGF165及AAV-TGFβ1转染兔椎间盘纤维环细胞的实验研究[J].中华骨科杂志,2006,26(6):409-414. |
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| 作者姓名： | 董跃福 胡有谷 王德春 |
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| 作者单位： | 266003,青岛大学医学院附属医院骨科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（项目批准号：30271318;分类号：C03030306） |
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| 摘 要： | 目的探讨应用hVEGF165与TGFβ1基因逆转椎间盘退变的可行性。方法用分子克隆技术，从pcDNA3（＋）-AAV-hVEGF165获得AAV-hVEGF165cDNA，并克隆至AAV包装质粒pSNAV上，构建成pSNAV-hVEGF165的AAV重组质粒。经酶切及测序鉴定后，用脂质体介导pSNAV-hVEG165转染HEK293细胞和血管内皮细胞。荧光免疫组化方法检测hVEGF165蛋白，并用MTT法测定hVEGF165对血管内皮细胞增殖的影响。由本元正阳公司对pSNAV-hVEGF165进行AAV-hVEGF165包装。AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1联合转染退变的椎间盘纤维环细胞，Western blot检测hVEGF165与TGFβ1的表达以及纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量的变化。结果经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hVEGF165构建完成，荧光免疫组化显示hVEGF165蛋白表达，MTT法显示hVEGF165蛋白对血管内皮细胞增殖有促进作用。本元正阳公司包装出具有生物学功能的AAV-hVEGF165与AAV-hVEGF165构建成功。Western blot显示hVEGF165与TGFβ1在纤维环细胞中表达，AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1双基因联合转染的纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量较hVEGF165与TGFβ1基因各自单独转染的细胞Ⅰ型胶原表达量明显增多。结论hVEGF165在体外能够协同TGFβ1促进退变纤维环细胞Ⅰ型胶原表达增加。
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子A 转化生长因子β 椎间盘 胶原Ⅰ型 |
| 收稿时间： | 2005-06-30 |
| 修稿时间： | 2005-06-30 |
Construction of AAV-hVEGF165 and the biological effect of hVEGF165 and TGFβ1 in degenerative annulus fibrosus cell of intervertebral disc |
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| DONG Yue-fu,HU You-gu,WANG De-chun.Construction of AAV-hVEGF165 and the biological effect of hVEGF165 and TGFβ1 in degenerative annulus fibrosus cell of intervertebral disc[J].Chinese Journal of Orthopaedics,2006,26(6):409-414. |
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| Authors: | DONG Yue-fu HU You-gu WANG De-chun |
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| Institution: | Department of Orthopaedics, the Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China |
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