莲子心新碱对转化生长因子β1 诱导的H1299 细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制 |
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引用本文: | 张婉婷,王歆竹,米玉辉,杨光明,潘扬.莲子心新碱对转化生长因子β1 诱导的H1299 细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制[J].中药新药与临床药理,2021,32(10):1459-1467. |
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作者姓名: | 张婉婷 王歆竹 米玉辉 杨光明 潘扬 |
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作者单位: | (1. 南京中医药大学药学院,江苏南京210023;2. 江苏省
中药炮制重点实验室,国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室,江苏南京210023;3. 南京中医药大学
药用菌与中药生物技术研究所,江苏南京210023) |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(81373295)。 |
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摘 要: | 目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)
H1299 细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制
作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL-1 的TGF-β1 诱导H1299 细胞构建EMT 模型;以15 ng·mL-1 的
TGF-β1 诱导H1299 细胞作为EMT 模型组,以法舒地尔(Fas)为阳性药,设置1、2、3 μmol·L-1 的莲子心新碱
实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8 法检测莲子心新碱对H1299 细胞的抑制率;
Western Blot 法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及间充质标记物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形
蛋白(Vimentin)以及ROCK 1 与P-Smad 2/3 蛋白的表达;Transwell 法检测莲子心新碱对TGF-β1 诱导的H1299
细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299 细胞内ROCK 1 蛋白的表达及分布。结果TGF-β1 诱导
后H1299 细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1 浓度的升高,E-cadherin 表达明显降
低(P<0.05,P<0.01),N-cadherin 与Vimentin 表达明显升高(P<0.01,P<0.001),并且ROCK 1 蛋白的表达
也在这一过程中升高(P < 0.05)。莲子心新碱可以抑制H1299 细胞的活力,IC50 为5.04 μmol·L-1;同时与模型
组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1 促进的H1299 细胞EMT 过程及侵袭迁移作用(P<0.001),中、高剂
量组明显增加E-cadherin 蛋白的表达(P<0.05),明显减少N-cadherin 和Vimentin 蛋白的表达(P<0.001),还
明显降低了H1299 细胞内因TGF-β1 诱导而升高的ROCK 1(P<0.001)和P-Smad2/3(P<0.001)蛋白的水平。
免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1 诱导的H1299 细胞胞质中ROCK 1 蛋白的表达及分布。
结论TGF-β1 可以诱导H1299 细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了
TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK 通路。
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关 键 词: | 莲子心新碱(NeoL) H1299 细胞 TGF-β1 ROCK 1 侵袭 迁移 |
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