| 蛋白C p.Ala333Thr突变引起遗传性蛋白C缺陷症的分子机制 |
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| 引用本文： | 余晓敏,常国林,郑逸旸,陈诚,唐施艺,吴鑫媛,吕佳,林向阳,朱丽青. 蛋白C p.Ala333Thr突变引起遗传性蛋白C缺陷症的分子机制[J]. 温州医科大学学报, 2022, 52(5): 352-357. DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2022.05.002 |
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| 作者姓名： | 余晓敏 常国林 郑逸旸 陈诚 唐施艺 吴鑫媛 吕佳 林向阳 朱丽青 |
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| 作者单位： | 1.温州医科大学附属第一医院 医学检验中心 浙江省检验诊断及转化研究重点实验室，浙江 温州 325015；2.温州医科大学附属第一医院 温州市血液学重点实验室，浙江 温州 325015；3.温州医科大学附属第二医院 病理科，浙江 温州 325027 |
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| 基金项目： | 温州市基础性科研项目（Y20190088）；浙江省医药卫生科技计划项目（2022KY205）；浙江省中医药科技计划项目（2021ZB181）；浙江省自然科学基金项目（LY22H200004） |
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| 摘 要： | 目的：探讨蛋白C（PC）p.Ala333Thr突变导致遗传性蛋白C缺陷症（IPCD）的分子机制。方法：使用氨基酸多序列比对工具T-Coffee评估突变氨基酸位点的保守性，使用突变有害性评分工具PolyPhen-2预测突变对PC结构和功能的危害性。利用定点突变试剂盒QuickMutationTM构建PC基因（PROC ）野生型和p.Ala333Thr突变型质粒，并瞬时转染入HEK-293T细胞进行体外表达，RT-qPCR检测突变PC转录24 h后的mRNA水平变化，利用蛋白印迹法（Western blot）和ELISA分别检测突变PC胞内外水平变化，并对细胞内质网、高尔基体PC进行免疫荧光染色，初步探讨p.Ala333Thr突变导致IPCD的分子机制。结果：多序列比对结果显示PC的Ala333位点保守性不高，PolyPhen-2对PROC 的p.Ala333Thr突变评分为0.763。成功转染野生型与p.Ala333Thr突变型PROC 质粒后，突变型PROC 转录水平无明显变化；Western blot结果显示，突变型PROC的PC表达量明显下降；免疫荧光染色结果显示，野生型PC在内质网和高尔基体均有大量分布，而p.Ala333Thr突变型PC主要分布于内质网。结论：PROC p.Ala333Thr突变可能导致了PC的错误折叠和加工障碍，造成胞外PC表达量下降，最终引起了IPCD的发生。
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| 关 键 词： | 遗传性蛋白C缺陷症 蛋白C 基因突变 胞内降解 |
| 收稿时间： | 2022-02-27 |
The pathogenic mechanism of inherited protein C deficiency caused by Ala333Thr mutation |
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| YU Xiaomin,CHANG Guolin,ZHENG Yiyang,CHEN Cheng,TANG Shiyi,WU Xinyuan,LYU Jia,LIN Xiangyang,ZHU Liqing.. The pathogenic mechanism of inherited protein C deficiency caused by Ala333Thr mutation[J]. JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL UNIVERSITY, 2022, 52(5): 352-357. DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2022.05.002 |
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| Authors: | YU Xiaomin CHANG Guolin ZHENG Yiyang CHEN Cheng TANG Shiyi WU Xinyuan LYU Jia LIN Xiangyang ZHU Liqing. |
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| Affiliation: | 1.Department of Laboratory Medicine, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Key Laboratory of Clinical Laboratory Diagnosis and Translational Research of Zhejiang Province, Wenzhou325015, China; 2.Department of Hematology, Wenzhou Key Laboratory of Hematology, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325015, China; 3.Department of Pathology, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325027, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | inherited protein C deficiency protein C gene mutation intracellular degradation |
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