谷氨酸诱导海马神经元凋亡涉及线粒体释放细胞色素C

目的：建立体外谷氨酸诱导神经元兴奋损伤模型,探索其凋亡发生是否通过线粒体信号转导途径介导的细胞色素C（CytC）释放而实现,为今后干预性使用神经保护剂提供依据。方法:分离及培养新生Wistar大鼠海马神经元,选用合适谷氨酸浓度建立神经元损伤模型;利用LDH测定及流式细胞仪AnnexinV/PI双染色法检测谷氨酸暴露后不同时点神经元凋亡及坏死的动态改变;采用Westernblotting法检测caspase-3活性及线粒体内和胞浆内CytC水平动态变化。结果:谷氨酸诱导神经元损伤呈明显浓度及时间依赖性,50μmol/L浓度可使LDH释放量明显增加(18.4%,P<0.05),暴露后6h凋亡率显著增加;凋亡发生前,神经元caspase-3活性已明显增高（3h）,6h达高峰;线粒体CytC释放发生在caspase-3增高前,30min时胞浆内CytC水平即明显增加（P<0.05）,3h胞浆内CytC水平超过线粒体内,而线粒体内CytC水平进行性减少。结论:50μmol/L谷氨酸可诱导海马神经元凋亡,凋亡机制可能是通过损伤线粒体膜,使CytC易位释放入胞浆激活caspase级联反应而致。