抑制性寡核苷酸（CpG-N ODN）拮抗刺激性寡核苷酸（CpG-S ODN）的作用及其机制研究

目的：寻找有效的抑制性CpG ODN，并研究其对刺激CpG ODN（CpG-S ODN）1826诱导细胞分泌TNF-α的影响及其作用机制和对脓毒症小鼠的影响。方法：选用本室前期采用生物信息学技术合成的21种CpG ODN，筛选出对CpG-S ODN诱导hPBMC释放TNF-α具有抑制作用的CpG-N ODN；采用亲和传感技术观察该CpG-NODN与CpG-S ODN间的相互结合；采用流式细胞技术观察CpG-NODN对的影响；并采用RT-PCR技术和EMSA技术观察CpG-N ODN对CpG-S ODN诱导的hPBMC TLR9表达的影响以及NF-xB活化的影响。同时观察了CpG-N 0DN对脓毒症小鼠的保护作用，并检测小鼠血清TNF-α水平。结果：从前期合成的CpG ODN中成功的筛选出了能有效抑制CpG-S ODN诱导hPBMC释放TNF-α的CpG-N ODN，并发现当浓度比为3：5，4：5，和1：1时均能有效抑制CpG-S ODN对hPBMC的刺激活性，其中浓度比为1：1的CpG-N ODN对刺激性CpG-S ODN诱导hPBMC分泌TNF-α抑制作用最强，并呈一定时效关系；应用亲和传感技术可以看出CpG-SODN与CpG-NODN没有直接结合作用；同时CpG-NODN还可以明显抑制hPBMC表面结合和内化CpG-SODN，并抑制CpGSODN刺激的hPBMC TLR9 mRNA的表达及NF-xB的活化。同时CpG-N0DN还可有效的降低由于细菌DNA导致的小鼠死亡，并降低小鼠小鼠血清TNF-α水平。结论：成功筛选出有效的CpG-NODN，该CpG-NODN对CpG-SODN活化hPBMC具有抑制作用，这种抑制作用可能与影响hPBMC表面结合和内化CpG-SODN，抑制TLR9表达，进而抑制NF-xB的活化有关。同时该CpG-NODN对脓毒症小鼠的具有保护作用。