人血管生成素—1和血管内皮生长因子VEGF165腺病毒载体构建

目的：克隆人血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)和血管生成素－1（angiopoietin-1)的全长编码基因，构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Ang1和Ad-VEGF165。方法：通过RT－PCR方法克隆人VEGF165和Ang1全长编码基因。Ad-VEGF165和Ad-Ang1通过同源重组方法构建。将Ad-VEGF165和／或Ad-Ang1转染大鼠胚胎心脏成肌细胞（H9C2）24h后，Western blot/方法分析VEGF165和Ang1蛋白表达量；核酸电泳分析细胞基因组降解检测凋亡水平。结果：测序显示VEGF165序列与基因库序列相同；Ang1序列与基因库序列存在一个碱基的差异，但编码氨基酸无改变。VEGF165和Ang1蛋白表达分别为对照组的11.65倍和3．53倍。Ad-VEGF165和／或Ad-Ang1转染后的H9C2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡具有明显的抵抗能力。结论：所构建的Ad-Ang1和Ad-VEGF165能有效转染心脏成肌细胞，表达出功能性目的蛋白，具有抗细胞凋亡作用。