周期性张应力联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞成骨分化的实验研究

目的探讨周期性张应力（CTS）联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞（ASCs）成骨分化的作用。 方法分离10只Sprague-Dawley(SD)大鼠的ASCs，分别按不同的干预方法将收集的ASCs细胞分为对照组（仅用普通培养基干预）、淫羊藿苷组（仅用淫羊藿苷干预）、1000μ组（仅用1000μ的CTS干预）、2000μ组（仅用2000μ的CTS干预）、3000μ组（仅用3000μ的CTS干预）和联合干预组（用2000μ的CTS联合淫羊藿苷进行干预）。淫羊藿苷的作用浓度为10-7mol/L；CTS的设置参数为频率1.0Hz，应力大小分别为1000μ strain（简称1000μ）、2000μ、3000μ，每刺激5s之后休息15s，每日总刺激时间为2h。干预7d后,收获细胞采用Western Blot法检测碱性磷酸酶（ALP）蛋白的表达；用淫羊藿苷联合2000μ的CTS对ASCs进行干预3d后，收获ASCs细胞用Western Blot法检测其Runt相关基因转录因子2（Runx2）、YES相关蛋白（YAP）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达；分别于干预3d和7d后，采用ALP活性定量检测试剂盒对ALP活性进行检测；干预3d后，利用RT-PCR检测YAP下游靶基因CTGF和锚蛋白重复结构域1（Ankrd1）的表达；干预7d后，利用RT-PCR检测成骨分化相关基因骨桥素（OPN）和Ⅰ型胶原的表达，并对各组所得数据进行统计学分析比较。 结果淫羊藿苷和CTS（1000μ、2000μ、3000μ）均能显著促进ALP蛋白的表达。与1000μ和3000μ应力大小的CTS相比，2000μ的CTS具有最强的促ALP蛋白表达能力；且2000μ的CTS联合淫羊藿苷能显著促进ALP的表达及Runx2和CTGF的表达，且其联合作用时效应更明显；但淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用并不能促进YAP蛋白的表达，只有联合作用时才具有促YAP表达作用。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d和7d后均能显著上调ALP的活性，且其联合作用时上调ALP活性的效应更加明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用7d后，能显著促进成骨分化基因OPN和Ⅰ型胶原蛋白的表达，且联合作用时效应更明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d后能显著促进YAP靶基因CTGF和Ankrd1的表达，联合作用时效应更明显。 结论CTS和淫羊藿苷联合作用可以通过上调YAP活性来促进ASCs的成骨分化。