| 利用双重sgRNAs构建miR-223全基因敲除小鼠 |
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| 引用本文： | 赵宣,王晓亚,刘莉,刘佩娟,辛智倩,师长宏,张彩勤,白冰,黄勇,张海.利用双重sgRNAs构建miR-223全基因敲除小鼠[J].中国比较医学杂志,2019(6):27-31. |
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| 作者姓名： | 赵宣 王晓亚 刘莉 刘佩娟 辛智倩 师长宏 张彩勤 白冰 黄勇 张海 |
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| 作者单位： | 空军军医大学实验动物中心;西北农林科技大学动物医学院;西北工业大学生命学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(31672535);全军实验动物专项课题(SYDW(2016)001) |
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| 摘 要： | 目的 利用双重sgRNAs构建miR-223全基因敲除小鼠。方法 针对miR-223基因设计双重sgRNAs,将体外转录的sgRNAs和Cas9 mRNA共同显微注射入C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行PCR扩增和测序以鉴定基因型,同时取小鼠肝脏研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miR-223在肝脏中的表达。结果 设计了miR-223基因双重sgRNAs并对其进行了体外转录,纯化后显微注射小鼠受精卵细胞获得miR-223基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有3种基因型,一种为6 bp的缺失突变,但未对miR-223序列产生影响;另外两种为162 bp和168 bp的缺失突变,完全删除miR-223前体和成熟区序列。与野生型相比,这两种小鼠肝组织中几乎不能检测到miR-223的表达。结论 设计双重sgRNAs并应用CRISPR/Cas9技术成功构建miR-223全基因敲除小鼠。
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| 关 键 词： | 双重sgRNAs CRISPR/Cas9 miR-223 基因敲除小鼠 |
Construction of miR-223 full-sequence-knockout mice with dual sgRNAs |
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| ZHAO Xuan,WANG Xiaoya,LIU Li,LIU Peijuan,XIN Zhiqian,SHI Changhong,ZHANG Caiqin,BAI Bing,HUANG Yong,ZHANG Hai.Construction of miR-223 full-sequence-knockout mice with dual sgRNAs[J].Chinese Journal of Comparative Medicine,2019(6):27-31. |
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| Authors: | ZHAO Xuan WANG Xiaoya LIU Li LIU Peijuan XIN Zhiqian SHI Changhong ZHANG Caiqin BAI Bing HUANG Yong ZHANG Hai |
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| Institution: | (Laboratory Animal Center,Air Force Medical University,Xi’an 710032,China;College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100;School of Life Sciences,Northwestern Polytechnical University,Xi’an 710068) |
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| Abstract: | ZHAO Xuan;WANG Xiaoya;LIU Li;LIU Peijuan;XIN Zhiqian;SHI Changhong;ZHANG Caiqin;BAI Bing;HUANG Yong;ZHANG Hai(Laboratory Animal Center,Air Force Medical University,Xi’an 710032,China;College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100;School of Life Sciences,Northwestern Polytechnical University,Xi’an 710068) |
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| Keywords: | Dual sgRNAs CRISPR/Cas9 miR-223 gene-knockout mice |
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