RNAi干扰Twist基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖与侵袭力及E-钙黏蛋白甲基化的影响

目的探讨RNAi干扰Twist基因对喉鳞状细胞癌Hep 2细胞株增殖、侵袭力及E 钙黏蛋白甲基化的影响。方法培养人喉鳞状细胞癌Hep 2细胞株,分别转染siRNA Twist（siRNA Twist组）、阳性对照siRNA GAPDH（阳性对照组）和阴性对照错义链（阴性对照组）,利用实时荧光定量PCR技术检测各转染组细胞中Twist和E cad基因表达,Western blot法检测各转染组细胞中Twist和E cad蛋白表达,MTT比色法检测各转染组细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）检测不同转染组细胞中E cad甲基化表达。结果siRNA Twist组细胞中Twist mRNA和Twist蛋白表达量均低于阳性对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义（P<0.05）;siRNA Twist组细胞中E cad mRNA和E cad蛋白表达量均高于阳性对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与阳性对照组和阴性对照组相比,siRNA Twist组细胞转染48 h～96 h时细胞增殖能力明显减弱,差异均具有统计学意义（P<0.05）;siRNA Twist组细胞迁移细胞数和侵袭细胞数均低于阳性对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义（P<0.05）;MSP 检测结果显示,siRNA Twist组细胞中E cad甲基化扩增条带呈弱阳性,表达强度显著低于阳性对照组和阴性对照组,而非甲基化扩增条带呈阳性。结论特异性抑制Twist基因表达可能通过影响E cad甲基化而上调E cad表达,从而抑制细胞增殖及侵袭能力,有望为喉鳞状细胞癌基因治疗提供新的靶点。