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| 针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较 | |
| 引用本文： | 温伟红,刘家云,王凯,薛茜,孟艳玲,赵晶,贾林涛,薛采芳,王成济,杨安钢.针对S基因的siRNA或shRNA表达框对HepG2.2.15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用比较[J].中华微生物学和免疫学杂志,2007,27(4):353-357. |
| 作者姓名： | 温伟红 刘家云 王凯 薛茜 孟艳玲 赵晶 贾林涛 薛采芳 王成济 杨安钢 |
| 作者单位： | 1. 710032,西安,肿瘤生物学国家重点实验室,第四军医大学免疫学教研室 2. 710032,西安,肿瘤生物学国家重点实验室,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 3. 710032,西安,肿瘤生物学国家重点实验室,第四军医大学病原生物学教研室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助（30400379,30500433）;国家重点基础研究发展规划（973）基金资助（2004CB518805）;长江学者和创新团队发展计划资助（IRT0459） |
| 摘 要： | 目的 化学合成针对乙型肝炎病毒（HBV）S基因的siRNA，同时制备针对相同区段的shRNA表达框，并比较二者对HepG2．2．15细胞中HBV基因表达和病毒复制的抑制作用。方法 化学合成针对HBVS基因的带有FITC标记的siRNA，设计合成带有FTrc标记的引物，PCR扩增含有RNA聚合酶Ⅲ启动子H1序列和shRNA编码序列的表达框，并对扩增产物进行纯化，将等摩尔数siRNA和shRNA表达框分别用脂质体转染稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，转染1d后流式细胞仪检测转染效率，转染3d后RT-PCR检测靶基因mRNA的水平，用SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测HBsAg的表达。收集转染前和转染后1、3、5和7d的细胞培养上清，检测HBsAg水平，同时用荧光定量PCR方法检测HBV DNA的含量。结果成功制备了针对HBVS基因的shRNA表达框，将其与等摩尔数siRNA分别转染HepG2．2．15细胞后，RT-PCR证实细胞中HBV mRNA水平降低，SDS-PAGE、Westem blot及间接免疫荧光染色检测到HBsAg的表达受到抑制，细胞培养上清中HBsAg和HBV DNA含量下降。与siRNA相比，shRNA表达框对HBV的抑制作用虽然起效较慢，但持续时间更长。结论shRNA表达框和siRNA均可明显抑制HBV的转录和表达，与siRNA相比，shRNA表达框能够更持久地抑制靶基因的表达。 |
| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒 RNA干扰 shRNA表达框 siRNA |
| 修稿时间： | 2006-01-25 |
Inhibition of HBV gene expression and replication in HepG2.2.15 cells by siRNA or shRNA expressing cassettes targeting HBV S gene |
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| WEN Wei-hong,LIU Jia-yun,WANG Kai,XUE Qian,MENG Yan-ling,ZHAO Jing,JIA Lin-tao,XUE Cai-fang,WANG Cheng-ji,YANG An-gang.Inhibition of HBV gene expression and replication in HepG2.2.15 cells by siRNA or shRNA expressing cassettes targeting HBV S gene[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2007,27(4):353-357. | |
| Authors: | WEN Wei-hong LIU Jia-yun WANG Kai XUE Qian MENG Yan-ling ZHAO Jing JIA Lin-tao XUE Cai-fang WANG Cheng-ji YANG An-gang |
| Abstract: | |
| Keywords: | Hepatitis B virus RNA interference shRNA expressing cassettes siRNA |
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