| 摘 要： | 目的 :探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)对小鼠皮层神经元酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)功能的影响及机制。方法:取原代培养小鼠皮层神经元,通过应用钙影像、全细胞膜片钳、免疫荧光和Western Blot等技术,分别观察PKA激动剂和抑制剂对ASICs功能的影响及机制。结果:(1)在给予PKA激动剂或抑制剂前神经元ASICs电流幅值约为(224.2±17.59)pA(n=15),预孵育PKA激动剂forskolin(10μmol/L)使电流幅值减小为(108±14.67)pA(n=9),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而预孵育PKA抑制剂PKAI(5μmol/L)则使电流幅值增加为(306.3±22.9)pA(n=12),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(2)在给予PKA激动剂或抑制剂前,酸诱导的胞内钙△F/F值为(0.708±0.07)(n=20),PKA激动剂forskolin(10μmol/L)使其减少为(0.140±0.013)(n=17),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),PKA抑制剂PKAI(5μmol/L)使其增加为(0.978±0.108)(n=19),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(3)在加入forskolin或PKAI 24 h后,神经元ASIC1总荧光密度无明显改变(P>0.05),但神经元ASIC1膜荧光密度从对照组的(78.58±7.42)(n=32)减少到forskolin孵育后的(31.41±3.38)(n=57),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而PKAI孵育后神经元ASIC1膜荧光密度增加到(118.29±11.50)(n=34),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 :PKA通过影响ASICs膜分布负性调节小鼠皮层神经元ASICs电流及由酸诱导的胞内钙增加。
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