| SA-TNF-α融合蛋白高效表达、纯化及复性研究 |
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| 作者姓名： | 徐翠香 胡志明 李金龙 高基民 |
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| 作者单位： | 南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,510515;南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,510515;南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,510515;南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,广东,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，广东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 研究链亲和素标记的人肿瘤坏死因子α(SA-TNF-α)融合蛋白的纯化、复性方法 ,并研究其生物学功能.方法 在大肠杆菌中表达SA-TNF-α融合蛋白,对表达的SA-TNF-α融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,分别在尿素体系和盐酸胍体系中复性,Western blot对其进行鉴定.MTT法检测SA-TNF-α融合蛋白对L929细胞的杀伤活性,流式细胞仪分析SA-TNF-α融合蛋白对生物素化的MB49细胞锚定修饰率.结果 SA-TNF-α融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的目标蛋白占菌体蛋白30%以上,镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱纯化的SA-TNF-α融合蛋白纯度达到95.7%,经过两种体系复性形成的SA-TNF-α融合蛋白的二聚体和多聚体均具有双功能活性:既对L929细胞有杀伤活性又能锚定修饰生物素化的MB49细胞,锚定修饰率大于90%.结论 初步建立了SA-TNF-α融合蛋白制备工艺,SA- TNF-α二聚体和多聚体均具有双功能活性,SA-TNF-α融合蛋白的研制有望为肿瘤的治疗提供新的治疗方法 及新型药物.
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| 关 键 词： | 人肿瘤坏死因子α 链亲和素 融合蛋白 蛋白纯化 蛋白复性 |
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