| 人CD123稳定表达细胞株的建立与鉴定 |
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| 引用本文： | 杨漾,黄亮,王娜,周剑峰. 人CD123稳定表达细胞株的建立与鉴定[J]. 中华全科医学, 2011, 9(5): 667-669 |
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| 作者姓名： | 杨漾 黄亮 王娜 周剑峰 |
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| 作者单位： | 杨漾 (华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科,武汉市,430030) ; 黄亮 (华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科,武汉市,430030) ; 王娜 (华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科,武汉市,430030) ; 周剑峰 (华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科,武汉市,430030) ; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,国家科技重大专项课题 |
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| 摘 要： | 目的探索建立人CD123稳定表达细胞株的方法,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产提供材料。方法构建人CD123 CDS区真核表达载体(hCD123 CDS-pEGFP-N1);经脂质体包裹转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-S;经流式分选结合G418筛选,并用流式细胞术和Western印迹法检测人CD123蛋白的表达情况,初步筛选出人CD123高表达的CHO-S细胞株;并进一步用经人CD123 Fc重组融合蛋白免疫的小鼠血清检测该细胞株hCD123表达情况。结果测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD123基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确;流式分选结合G418筛选得到1个人CD123高表达的细胞株——克隆8G9 CHO-S,其CD123-APC阳性细胞百分数为92.07%,用融合蛋白免疫的血清检测各细胞株人CD123表达情况,结果显示克隆8G9 CHO-S细胞和对照CHO-S细胞的CD123阳性率分别为(97.94±1.93)%和(2.84±1.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论建立了人CD123抗原稳定高表达的细胞株克隆8G9 CHO-S,为进一步实现人CD123的抗体规模化生产及其导向治疗奠定了坚实的基础。
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| 关 键 词： | 人CD123 稳定表达 CHO-S细胞株 细胞筛选 |
Establishment and Identification of a Cell Line Stably Expressing Hcd123 |
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| Affiliation: | YANG Yang,HUANG Liang,WANG Na,et al.Department of Hematology in Tongji Hospital,Tongji Medical College,Hua Zhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,Hubei,China |
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