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| PCR产物液相杂交检测的优化 | |
| 引用本文： | 刘宇琴,钟咏梅,郭晏海. PCR产物液相杂交检测的优化[J]. 现代检验医学杂志, 2003, 18(2): 1-3 |
| 作者姓名： | 刘宇琴 钟咏梅 郭晏海 |
| 作者单位： | 1. 甘肃省医疗器械质检站,甘肃,兰州,730000 2. 福建省晋江医院检验科,福建,晋江,362200 3. 第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西,西安,710033 |
| 摘 要： | 目的 为了使液相杂交检测更加灵敏、特异、快速。方法 通过改进杂交液的成分,选择最佳的探针浓度,使5＇端标记生物素的PCR扩增产物与5＇端标记地高辛的探针在PCR反应管中进行液相杂交,杂交条件为:94℃ 10 s冷却到37℃ 10 s即完成杂交。杂交后产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面,同时在含高浓度DMSO的杂交液中将非特异结合的探针解离,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测。结果 液相杂交的条件优化:杂交液中二甲基亚砜(DMSO)浓度为300 ml·L~(-1),探针浓度为0.5μmol·L~(-1),杂交温度为37℃。对60～600 bp的PCR产物的杂交特异性无明显差异,可以检测到1×10~4copy的PCR产物,对100例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出HBV DNA阳性率为100％(30/30);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBe(+)的血清检出HBVDNA阳性率为78.6％(22/28);HBsAg(+)、抗HBe(+)的血清检出HBV DNA阳性率为66.7％(16/24),其余为阴性。结论 该液相杂交法操作简单、快速、灵敏、特异,适合临床实验室使用。 |
| 关 键 词： | PCR产物 液相杂交检测 优化 HBsAg |
| 文章编号： | 1671-7414(2003)02-001-03 |
| 修稿时间： | 2002-10-08 |
Optimization of Liquid-phase Hybridization Assay used for Detecting the Products of PCR |
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| LIU Yu-qin,ZHONG Yong-mei,GUO Yan-hai. Optimization of Liquid-phase Hybridization Assay used for Detecting the Products of PCR[J]. Journal of Modern Laboratory Medicine, 2003, 18(2): 1-3 | |
| Authors: | LIU Yu-qin ZHONG Yong-mei GUO Yan-hai |
| Abstract: | |
| Keywords: | PCR liquid-phase hybridization assay optimization |
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