浙贝母叶斑病病原真菌的分子鉴定及杀菌剂筛选

目的] 明确浙贝母叶斑病的致病菌种类，并筛选有效杀菌剂。方法] 采用病组织分离法，从浙贝母叶斑病病株中分离纯化真菌，以聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增基因组DNA的内源转录间隔区(internal transcribed spacer，ITS)、翻译延伸因子-1a(translation elongation factor-1a，TEF-1a)和微管蛋白基因(tubulin gene，TUB)并双向测序，经DNAMAN 9.0软件拼接后利用基本局部对齐搜索工具(basic local alignment search tool，BLAST)进行分析。采用邻接法构建系统发育树以鉴定真菌种类，采用菌饼接种寄主植物和组培苗的柯赫氏法检测致病性，以生长速率法和抑菌圈法室内筛选病原真菌的有效杀菌剂。结果] 从浙贝母叶斑病病株中分离纯化获得1种间座壳属(Diaporthe)真菌。分离物的ITS、TEF-1a和TUB扩增片段与GenBank中Diaporthe eres(无性型为Phomopsis oblonga，P. oblonga)相应片段的同源性分别为100%、99.73%和96.95%(登录号:LC342971、MW804672、MT561360)。在间座壳属中，分离物与P. oblonga的亲缘关系最近。该菌株接种浙贝母植株和组培苗后诱发浙贝母叶斑病。吡唑醚菌酯、咯菌腈、异菌脲、苯醚甲环唑、腈菌唑、咪鲜胺对该真菌的半最大效应浓度(concentration for 50% of maximal effect，EC50)分别为0.174、0.084、1.092、0.041、0.619和0.004 mg·mL-1；6种杀菌剂对P. oblonga孢子萌发的抑制效果为咪鲜胺>吡唑醚菌酯>苯醚甲环唑>腈菌唑>咯菌腈和异菌脲。结论] 本研究证实，P. oblonga是浙贝母叶斑病病原真菌，咪鲜胺和苯醚甲环唑是防治浙贝母叶斑病的有效杀菌剂。

Molecular Identification and Indoor Fungicide Screening of Pathogenic Fungi of Leaf Spot Disease of Fritillaria Thunbergii Miq