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| 弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建 | |
| 引用本文： | 彭碧文,郑大利,黄清玲,陈慧菁,林建银,蒋明森. 弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建[J]. 中国病原生物学杂志, 2003, 16(3): 140-143 |
| 作者姓名： | 彭碧文 郑大利 黄清玲 陈慧菁 林建银 蒋明森 |
| 作者单位： | 1. 福建医科大学分子医学研究中心,福建福州,350004;武汉大学医学院寄生虫学教研室,湖北武汉,430071 2. 福建医科大学分子医学研究中心,福建福州,350004 3. 武汉大学医学院寄生虫学教研室,湖北武汉,430071 |
| 基金项目： | 福建省科技三项费用资助项目 (No.K2 0 0 1 0 72 ) |
| 摘 要： | 目的 构建编码弓形虫 RH株 P2 4基因的细胞内定位载体并进行其序列测定。 方法 弓形虫 RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,Trizol试剂盒抽提基因组 RNA;根据基因库 P2 4基因序列设计合成引物 ,采用 RT- PCR法扩增编码P2 4的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将 P2 4基因定向克隆到细胞内定位载体 p CMV/ myc系列 :p CMV/myc/ cyto(胞质定位 )、p CMV/ myc/ nuc(核定位 )、p CMV/ myc/ mito(线粒体定位 )及 p CMV/ myc/ ER(内质网定位 )。转化大肠杆菌 TOP10感受态细胞 ,在氨苄青霉素阳性 L B培养基平板上筛选出阳性克隆。重组子经双酶切 ,PCR鉴定 ,最后对重组子进行序列测定。 结果 RT- PCR方法从弓形虫 RH株扩增 5 72 bp的 P2 4基因片段 ,分别构建重组质粒p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和 p CMV/ myc/ ER- P2 4 ,酶切和 PCR鉴定产物大小与预期值相符合 ,序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码 P2 4抗原的基因片段。 结论 成功构建编码弓形虫表面抗原 P2 4基因真核细胞内定位载体重组质粒 p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和p CMV/ myc/ ER- P2 4 |
| 关 键 词： | 弓形虫 致密颗粒蛋白P24 基因克隆 细胞内定位 |
| 文章编号： | 1001-6627(2003)03-0140-04 |
| 修稿时间： | 2002-09-28 |
CONSTRUCTION OF INTRACELLULAR TARGETING pCMV/myc RECOMBINANT PLASMIDS OF P24 GENE FRAGMENT OF TOXOPLASMA GONDII |
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| PENG Bi-wen ,,ZHENG Da-Li,HUANG Qing-ling,CHEN Hui-jing,LIN Jian-yin,JIANG Ming-sen. CONSTRUCTION OF INTRACELLULAR TARGETING pCMV/myc RECOMBINANT PLASMIDS OF P24 GENE FRAGMENT OF TOXOPLASMA GONDII[J]. Journal of Pathogen Biology, 2003, 16(3): 140-143 | |
| Authors: | PENG Bi-wen ZHENG Da-Li HUANG Qing-ling CHEN Hui-jing LIN Jian-yin JIANG Ming-sen |
| Affiliation: | PENG Bi-wen 1,2,ZHENG Da-Li1,HUANG Qing-ling1,CHEN Hui-jing1,LIN Jian-yin1,JIANG Ming-sen2 |
| Abstract: | |
| Keywords: | Toxoplasma gondii P24 clone intracellular targeting |
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