三基序蛋白25过表达对肺癌细胞H1299顺铂敏感性的影响

目的：初步探讨三基序蛋白25（tripartitemotifcontaining25,TRIM25）过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制。方法：应用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体,瞬时转染人肺癌细胞株H1299,荧光显微镜下观察转染效率,Westernblot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时丙酮酸激酶M2（pyruvatekinaseisozymetypeM2,PKM2）蛋白水平的变化。用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24h,MTT法检测细胞耐药性,AnnexinV/PI双染法流式细胞仪（flowcytometry,ＦＣＭ）检测细胞凋亡。结果：同H1299空白组和转染pGCMV/neo空载体组比较,pGCMV-trim25转染组细胞中TRIM25蛋白的表达水平明显增加（P=0.003,P=0.005）;且TRIM25过表达时,细胞中PKM2蛋白的表达水平降低（P=0.001,P=0.003）。用顺铂处理后,pGCMV-trim25转染组细胞的药物敏感性显著下降（P<0.001）,转染组细胞凋亡率亦明显降低（P<0.001）。结论：TRIM25在肺癌细胞H1299中高表达时,可能通过下调PKM2而降低对顺铂的敏感性。