大鼠脂肪干细胞定向分化为成骨细胞及体外增殖过程中地塞米松的抑制性干预

背景:不同浓度的地塞米松在体外诱导脂肪千细胞向成骨细胞分化过程中所起的作用是不同的,其作用机制尚不明确.目的:验证脂肪干细胞向成骨细胞分化的能力,观察成骨细胞分化早期不同浓度地塞米松对脂肪干细胞体外增殖的抑制效果.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/03在南方医科大学组织工程研究中心完成.材料:5周龄雄性SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供.地塞米松为Sigma公司产品.方法:切取大鼠腹股沟皮下脂肪组织,用酶消化法分离培养脂肪干细胞,传至第3代后,加入条件培养液(含胎牛血清、维生素C、β-甘油磷酸钠、青霉素、链霉素的DMEM高糖完全培养基)进行体外预培养.设立2组:地塞米松组分别于细胞传代后第0,2,4天向培养基中加入10-6mol/L地塞米松1mL,空白对照组仅加入等量条件培养液.主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长及成骨分化情况.采用MTT比色法检测细胞增殖情况.结果:①原代培养中贴壁细胞多数呈长梭形,少数呈小圆形或三角形,六七天后进行传代;传代后细胞生长速度较原代细胞明显增快,至第15代细胞仍未出现明显衰老现象;第3代细胞在加入地塞米松后逐渐呈均一的长梭形,随时间延长呈叠形多层排列,细胞外基质明显增多,并逐渐形成多个小结样结构.空白对照组细胞形态不一,部分细胞呈多边形或三角形,细胞外基质明显少于地塞米松组,罕见小结样结构.②在体外传代培养过程中,空白对照组脂肪干细胞能够保持持续分裂增殖的能力.与空白对照组比较,细胞传代培养后0,2 d加入地塞米松,干预6,8,10,12 d时细胞数量均明显下降(P<0.05);传代培养后4 d加入地塞米松,干预6,8,10,12 d时细胞数量无明显变化(P>0.05).结论:传代的脂肪干细胞经地塞米松处理后,细胞形态趋于成熟,生长速度减慢,可定向分化为成骨细胞.在向成骨细胞分化早期,地塞米松能够抑制脂肪干细胞的体外增殖.

Inhibitory effect of dexamethasone on proliferation and differentiation of adipose-derived stem cells into osteoblasts in rats