| 摘 要： | ![]()
目的构建并制备表达人CD137L蛋白的5型重组腺病毒(Ad5-CD137L), 并初步研究其在小鼠中的抗肿瘤免疫效果。方法将密码子优化CD137L蛋白的表达基因插入pDC316穿梭质粒,并与pBH-GloxΔE1,3Cre腺病毒骨架质粒, 共同转染HEK293细胞, 构建Ad5-CD137L种子。扩增并纯化后, 对所得Ad5-CD137L重组腺病毒的插入目的基因与蛋白表达情况进行鉴定。检测Ad5-CD137L在C57BL/6小鼠体内的特异性细胞免疫和抗肿瘤免疫水平。结果成功地构建了Ad5-CD137L, PCR和测序结果表明插入目的基因与构建理论值相符。免疫荧光法鉴定Ad5-CD137L能在HEK293细胞中表达目的蛋白, 经Western印迹法鉴定该目的蛋白的相对分子质量约为25 000, 与理论值相符。与空腺病毒相比, Ad5-CD137L能显著诱导小鼠特异性IFN-γ(t=6.315, P=0.003), 抗肿瘤免疫效果更显著(t21 d=8.275, t29 d=4.492;t39 d=5.101, P均<0.001)。结论成功构建了Ad5-CD137L, 该重组病毒具有...
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