反义基质金属蛋白酶2基因影响人增殖期血管瘤的体内实验☆

背景：研究表明，通过转染反义基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)基因抑制增殖期血管瘤组织中MMP-2的分泌将成为增殖期血管瘤治疗的重要手段。目的：观察反义MMP-2cDNA基因感染对人增殖期血管瘤裸小鼠移植瘤生长的影响。设计、时间及地点：随机分组设计，对比观察，实验于2003-08/2004-09在四川大学华西临床医学院完成。材料：BALB/c-nu/nu裸小鼠(简称为裸鼠)18只，体质量20 g左右；取1名出生52 d女性患儿左胸壁的海绵状血管瘤， 病理诊断证实为增殖期血管瘤。方法：将手术切除的人增殖期血管瘤新鲜标本切分为5 mm×4 mm×3 mm小块，于1 h内移植于18只裸小鼠双侧腋部皮下，制备荷瘤裸小鼠血管瘤移植模型。将移植瘤块成活后(45 d)15只裸鼠进行分组治疗，Ad-GFP组，Ad-aMMP-2组分别沿肿瘤长径多方向瘤内注射重组腺病毒液Ad-GFP和Ad-aMMP-2，对照组注射等量的PBS，每组5只。隔日瘤内注射1次，共注射4次。主要观察指标：①大体观察肿瘤体积的变化及各组裸鼠肿瘤块坏死面积的比较。②绿色荧光蛋白在各组裸鼠体内的表达。③肿瘤组织形态学变化(大体、苏木精-伊红染色及透射电镜观察)。④免疫组织化学检测MMP-2 cDNA基因及微血管密度的表达。⑤流式细胞仪检测肿瘤细胞的生长周期和凋亡。结果：①Ad-aMMP-2能抑制体内血管瘤的生长，没有观察到明显的毒副作用。3组肿瘤均有不同程度的坏死，其中Ad-aMMP-2组面积坏死率明显高于对照组和Ad-GFP组(P < 0.01)。②组织学切片可见Ad-GFP组绿色荧光蛋白基因的表达。③大体观察对照组和Ad-GFP组瘤组织大；Ad-aMMP-2组瘤组织相对较小。苏木精-伊红染色可见对照组和Ad-GFP组内皮细胞密集，细胞呈条索状或团块状排列；Ad-aMMP-2组肿瘤有多处出血和凝固性的片状坏死灶。透射电镜观察对组血管内皮细胞形态正常；Ad-GFP组瘤细胞大，核仁明显；Ad-aMMP-2组部分血管内皮细胞核内染色质固缩，聚积成团块状形成凋亡小体。④Ad-aMMP-2组MMP-2和微血管密度较对照组和Ad-GFP组明显下降(P < 0.05)。⑤Ad-aMMP-2组G0/G1期百分率大于其他两组(P < 0.05)，增殖指数降低；Ad-aMMP-2组细胞凋亡率大于对照组和Ad-GFP组(P < 0.05)，凋亡指数明显增加。结论：通过反义MMP-2基因阻断人增殖期血管瘤的生长是可行的，其机制主要是通过抑制血管内皮细胞分泌MMP-2导致局部缺血起作用的。