| 建立只标记加成碱基的^32P后标记法以用于检测致癌物—DNA加成物 |
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| 引用本文： | 王良君,余应年.建立只标记加成碱基的^32P后标记法以用于检测致癌物—DNA加成物[J].癌变．畸变．突变,1993,5(4):30-35. |
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| 作者姓名： | 王良君 余应年 |
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| 作者单位： | 浙江医科大学病生教研室医学分子生物学实验室，浙江医科大学病生教研室医学分子生物学实验室，浙江医科大学病生教研室医学分子生物学实验室 杭州 310031，杭州 310031，杭州 310031 |
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| 摘 要： | 本文报道建立~(32)P后标记方法(~(32)P-Postlabeling Method)以用于检测致癌物-DNA加成物。其基本原理:用核酸酶P1(Nu.P1)完全消化DNA,释出5′单磷酸脱氧核苷(pN),而加成的碱基(Xi),则释出5′磷酸二脱氧核苷(pXipN);经前列腺酸性磷酸酶(PAP)作用后,分别生成N和XipN,然后经T_4多聚核苷酸激酶(PNK)作用,将γ-~(32)P]ATP的~(32)P转移XipN的5′末端上,生成标记*pXipN而N不被标记。经聚乙烯亚胺(PEI)纤维素薄层纯化、分离和放射自显影,则可确定已加成的碱基,若DNA量已知,则可进行定量分析。在人羊膜上皮细胞FL中,适量苯并(a)芘B(a)P]处理24b后,可分离到4个加成物斑块,其总相对标记量(Relative Adduct Labeling,RAL)有剂量依赖性关系。
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| 关 键 词： | 致癌物 DNA 加成物 磷32后标记法 |
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