细胞核抗原Sm B’的基因克隆和原核表达

目的：为建立抗Sm自身抗体检测方法，自行克隆、表达和鉴定细胞核抗原SmB’。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术。从HL-60细胞株中克隆SmB’全长基因，将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序，再定向克隆至pGEX—ST载体中，转入大肠杆菌BL-21，阳性克隆鉴定后在异丙基-B—D-硫代半乳搪苷（IPTG）诱导下表达，产物行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和蛋白质印迹法（Western blot）鉴定。结果：PCR产物约为700bp，与预期657bp接近，测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致。pGEX-5T—SmB’重组阳性克隆酶切鉴定正确。SDS—PAGE和Western blot结果显示融合蛋白分子量为51000，具有与抗SmB’抗体的反应性。结论：成功克隆表达核抗原SmB’，为建立抗Sm自身抗体检测方法奠定了基础。