| 携带AFP基因慢病毒载体制备并感染树突状细胞的实验研究 |
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| 作者姓名： | 李明峰 侯静 熊伟民 邸立军 任军 |
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| 作者单位： | 1. 解放军第四五五医院消化肿瘤科,上海,200052
2. 北京大学肿瘤研究所,北京,100036 |
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| 基金项目： | 上海市自然科学基金资助项目,南京军区卫生科研基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:制备携带AFP基因的慢病毒, 并体外感染树突状细胞(DC) , 制备AFP-DC疫苗.方法:以人HepG2肝癌细胞cDNA为模板PCR 扩增出AFP基因片段, 将该片段克隆入慢病毒载体, 构建成Lenti-AFP慢病毒载体.其后, 用慢病毒载体转染293T细胞, 包装慢病毒表达载体.通过酶切、 PCR对Lenti-AFP慢病毒载体进行鉴定.包装好的慢病毒体外感染DC, 制备AFP-DC疫苗, 流式细胞仪检测感染率, 免疫荧光、 RT-PCR 法及电化学发光法检测AFP表达.结果:酶切、 PCR鉴定证实, 慢病毒载体插入片段为AFP基因.包装的慢病毒具有良好的感染性, 可以在293T细胞中形成病毒颗粒, 携带AFP基因的慢病毒感染DC, 经免疫荧光、 RT-PCR法及电化学发光法证实DC能够表达转染基因AFP, 并且不会影响DC表型, 感染率高达78.91%.结论:成功构建携带AFP基因的慢病毒载体, 感染树突状细胞后表达AFP, 为DC疫苗在肝癌中的临床应用提供了实验基础.
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| 关 键 词： | 甲胎蛋白 慢病毒 基因转染 树突状细胞 |
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