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体外预处理骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死作用的实验研究
作者姓名:蔡鑫  惠杰
作者单位:苏州大学附属第一医院心内科
摘    要:目的初步研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)预处理后骨髓间充质干细胞(MSCs)产生的系列效应变化;并将预处理后的MSCs移植入大鼠心肌梗死模型,观察细胞归巢、增殖,及对心肌缺血区细胞凋亡、新生毛细血管生成、心室重构和心功能的影响,进一步探讨MSCs作用于缺血性心脏病的机理。方法干细胞部分:取SD大鼠胫骨及股骨分离骨髓,用全骨髓差异贴壁法培养MSCs,并进行表面标志鉴定;用5-溴脱氧尿核苷(Brd U)标记MSCs细胞,制作细胞爬片,检测其标记率,以确保标记能满足移植示踪及观察需要;将MSCs分别在不含(对照组)或含(SDF-1预处理组)SDF-1的无血清培养基中孵育60分钟,检测各上清液中血管内皮生长因子(VEGF)含量,及处理后细胞表面CXCR-4受体表达的变化。动物实验部分:建立大鼠心梗模型48只,随机平均分为三组:空白组(A),干细胞对照组(B),SDF-1预处理组(C);分别在其心梗后1天经尾静脉注射生理盐水(A组)、未处理的MSCs(B组)或SDF-1预处理后的MSCs(C组);移植后24小时检测梗死周边区心肌细胞凋亡;一周后检测梗死周边区归巢增殖的Brd U阳性细胞;四周后检测心功能,计算梗死面积,并通过血管荧光灌注显像检测梗死周边区新生血管密度。结果利用全骨髓差异贴壁法可以获取稳定分裂大鼠MSCs,经表型鉴定证明其为CD29~+CD90~+CD34~-细胞:用10μmol/L Brd U标记MSCs24小时,标记率>98%,能满足移植示踪需要;用SDF-1预处理MSCs可显著增加其释放VEGF能力[(68.92±5.03)pg/mL vs.(38.79±3.16)pg/mL,P<0.05],并使CXCR-4受体发生内摄作用,表现为膜外表达减少(P<0.05)。结论 (1)SDF-1预处理MSCs可显著增加其释放VEGF的能力,并使CXCR-4受体发生内摄作用,增强归巢能力,促进细胞旁分泌作用。(2)SDF-1预处理MSCs后移植,可减少大鼠梗死周边区心肌细胞的凋亡,增加缺血区的灌注,从而抑制心室重构,改善心功能。

关 键 词:预处理  心功能  心室重构  大鼠  周边区  移植  骨髓间充质干细胞  标记率  归巢  检测
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