| CEA单链抗体基因在大肠杆菌中的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 王冠华,孔建. CEA单链抗体基因在大肠杆菌中的克隆及表达[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 1998, 18(6): 486-489 |
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| 作者姓名： | 王冠华 孔建 |
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| 作者单位： | |
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| 摘 要： | 目的尝试将ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中进行高效表达。方法以ＣＥＡ单链抗体基因为模板，设计４对引物，ＰＣＲ扩增，将４条ＤＮＡ扩增片段分别插入原核表达载体ｐＢＶ２２０中；重组质粒转染大肠杆菌ＴＧ１，４２℃热诱导外源蛋白的表达；包涵体经８ｍｏｌ／Ｌ脲溶解及谷胱甘肽系统复性；过离子交换柱进行纯化；ＥＬＩＳＡ夹心法测活性。结果得到了ＳＤ序列与起始密码ＡＴＧ分别相隔着５，６，７，８个核苷酸的重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示转染入重组质粒的ＴＧ１菌经热诱导后有分子量约为３×１０４的外源蛋白，表达量最高达９３０ｍｇ／Ｌ培养液，约占菌体总蛋白的５０％；ＥＬＩＳＡ活性测定结果表明复性后的ＳｃＦｖ有较高的抗原结合活性。结论ＣＥＡ单链抗体在大肠杆菌中获得了较高水平的表达，且经复性后有较高的抗原结合活性。
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| 关 键 词： | 单链抗体 癌胚抗原 基因表达 |
Cloning and expression of CEA single chain Fv gene in E.coli |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Single chain Fv Carcinoembryonic antigen(CEA) Gene expression |
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