RUNX3全长和不同结构域原核表达载体的构建及其重组蛋白表达 |
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引用本文: | 宋艳艳,王桂玲.RUNX3全长和不同结构域原核表达载体的构建及其重组蛋白表达[J].吉林大学学报(医学版),2013,39(6):1112-1115. |
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作者姓名: | 宋艳艳 王桂玲 |
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作者单位: | (中国医科大学细胞生物学教研室 卫生部细胞生物学重点实验室,辽宁 沈阳 110001) |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助课题(30871294);辽宁省自然科学基金资助课题(201102277) |
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摘 要: | 目的:构建RUNX3全长和不同结构域的原核表达载体并表达其重组蛋白。方法:以pcDNA3.1-myc-RUNX3为模板,采用PCR法扩增RUNX3全长和各个结构域片段,通过EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点将RUNX3全长和不同结构域定向插入谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌(E.coli) BL21中诱导其融合蛋白表达,SDS-PAGE电泳检测其蛋白表达情况。结果:EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后得到与预期大小相符的FL(1 245 bp)、ΔRunt(843
bp)、Nter(159 bp)、Runt(402 bp)和Cter(684 bp)5个载体片段。SDS-PAGE电泳检测,RUNX3全长及各个结构域截短GST-RUNX3截短融合蛋白(GST-FL、GST-Runt、GST-Nter和GST-Cter)相对分子质量分别为72 000、40 000、32 000和51 000。 结论:成功构建RUNX3全长和各个结构域截短的GST标签的原核表达载体,并实现其重组蛋白在原核细胞中的表达。
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关 键 词: | RUNX3 载体 蛋白诱导 蛋白表达 |
收稿时间: | 2012-11-09 |
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