| 用SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血 |
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| 引用本文： | 闫梅,王立荣,王战勇,周艳,梁燕,肖白,刘敬忠.用SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血[J].中华医学遗传学杂志,2007,24(2). |
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| 作者姓名： | 闫梅 王立荣 王战勇 周艳 梁燕 肖白 刘敬忠 |
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| 作者单位： | 1. 100020,北京,首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心
2. 中国医学科学院基础医学研究所 |
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| 摘 要： | 目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC)和Tm(melting temperature)值分析。PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α4.2,-α3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α4.2和-α3.7的PCR产物长度分别为1.65kb、1.9kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×102个拷贝、4.3×102个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Green1实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α4.2、-α3.7、αα(包括αTα)及--SEA4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用。
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| 关 键 词： | 实时聚合酶链反应 SYBR-Green1 融解曲线 α-地中海贫血 |
Detection of α-thalassemia using real-time PCR and dissociation curve analysis |
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| YAN Mei,WANG Li-rong,WANG Zhan-yong,ZHOU Yan,LIANG Yan,XIAO Bai,LIU Jing-zhong.Detection of α-thalassemia using real-time PCR and dissociation curve analysis[J].Chinese Journal of Medical Genetics,2007,24(2). |
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| Authors: | YAN Mei WANG Li-rong WANG Zhan-yong ZHOU Yan LIANG Yan XIAO Bai LIU Jing-zhong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SYBR-Green1 |
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