预知子醇提物联合姜黄素抑制肝癌细胞增殖协同效应及机制探索＊

目的 探讨预知子醇提物（AFE）与姜黄素（CUR）联用抑制SMMC7721肝癌细胞增殖协同效应及机制。方法 将不同浓度预知子醇提物AFE（0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 g·L^-1）和姜黄素CUR（25.0、20.0、15.0、10.0、5.0 μmol·L^-1）分别作用于SMMC7721肝癌细胞72h,噻唑蓝法（MTT）获得细胞存活率;在此基础上进一步设置不同浓度9种组合,以药物相互作用指数（Coefficient of Drug Interaction,CDI）为标准筛选最佳协同效应组合,同时设置空白以及各自等剂量单药对照组,进一步采用光镜观察细胞形态、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（WB）检测线粒体和内质网应激凋亡、死亡受体途径相关蛋白表达量。结果 ①AFE 72h IC₅₀为2.09 g·L^-1;CUR 72h IC₅₀为16.90 μmol·L^-1;②AFE 1.5 g·L^-1 + CUR 15.0 μmol·L^-1组合协同效应最佳,CDI值为0.74 ± 0.06;③细胞形态方面,AFE作用后细胞增殖被抑制且出现ERS空泡样表现,CUR作用后细胞增殖被抑制但无相同形态变化,协同组类似二者效果的叠加;④AFE、CUR单独作用凋亡现象基本不出现,协同组诱导细胞凋亡现象则被显著增强,凋亡率显著高于其它3组（P < 0.05）;⑤协同组Bcl-2较对照和CUR组显著上升（P < 0.05）;AFE下调Caspase-9表达（P < 0.05）;Cleaved Caspase-9和Parp1均呈下降趋势,其中大片段Cleaved Parp1和小片段Cleaved Parp1均被CUR显著下调（P < 0.05）,但后者被AFE和协同组显著上调（P < 0.05）;AFE显著下调Bip表达（P < 0.05）;Chop在各用药组中表达量均被下调（P < 0.05）,且在协同组低于各单药组（P < 0.05）;p-JNK在AFE和协同组均被上调（P < 0.05）;IKBα 在CUR和协同组均被上调（P < 0.05）,且协同组高于各单药组（P < 0.05）。结论 预知子醇提物和姜黄素联合抑制肝癌细胞增殖协同效应确切;线粒体和内质网应激凋亡、死亡受体途径上,Bcl-2,Parp1,Chop、IKBα等诸多标志性分子可能参与该过程。

Synergistic Effect and Mechanism Exploration of Akebia Fructus Ethanol Extract and Curcumin on Proliferation Inhibition of SMMC7721 Hepatoma Cells