大鼠血红素加氧酶-1变异体对血清胆红素水平的影响

新生儿高胆红素血症是临床常见病症,传统疗法只能清除已经形成的胆红素,至今尚无一条有效途径能起到早期预防和治疗的作用。微粒体血红素加氧酶-1 (Heme Oxygenase-1, HO-1) 是血红素氧化降解为胆绿素的限速酶,抑制HO-1活力则能有效降低血清胆红素水平。本实验采用定点突变法以构建变异体大鼠HO-1 cDNA（25位组氨酸→丙氨酸,His25Ala）,检测变异体HO-1活力,并在酶促反应系统内加入与野生型HO-1等量的变异体HO-1,测定胆红素含量,以评价变异体HO-1的抑制作用,为临床防治新生儿高胆红素血症提供一条新途径。　　一、材料与方法　　1.剪切的野生型大鼠 HO-1 cDNA表达型质粒的构建：BamHI酶切表达型质粒pcDNA3后形成的粘性末端经DNA聚合酶I填平（Klenow大片段）。