重组蛋白HSP65-6×(IA2-P2)-His的构建、表达及分离纯化 |
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引用本文: | 李泰明,韩萌萌,林旋,刘俊,吴洁,金亮,刘景晶,徐茂磊.重组蛋白HSP65-6×(IA2-P2)-His的构建、表达及分离纯化[J].安徽医药,2013,17(5):732-734. |
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作者姓名: | 李泰明 韩萌萌 林旋 刘俊 吴洁 金亮 刘景晶 徐茂磊 |
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作者单位: | 中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009;中国药科大学天然药物活性物质与功能国家重点实验室,江苏,南京,210009 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(No20672464,No81172973,No31270985);中央高校基本科研业务费专项资金资助(NoJKY2011060);国家级大学生创新创业训练计划项目资助(NoC12066) |
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摘 要: | 目的构建HSP65-6×(IA2-P2)-His表达载体并研究其在大肠杆菌中的表达及分离纯化。方法通过酶切酶连的方法将6×(IA2-P2)-His替换pET-28a-HSP65-6×P277中的6×P277,构建好的载体经DNA测序分析构建成功。乳糖诱导表达的蛋白经Ni+柱分离纯化。最后用SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白。结果 HSP65-6×(IA2-P2)-His最高表达量占菌体总蛋白的65%,超声破碎后蛋白以可溶性的形式存在于裂解上清中。Ni+柱纯化后蛋白纯度可达80%电泳纯以上。最后West-ern blot鉴定目的蛋白具有抗原性和His标签。结论重组载体pET-28a-HSP65-6×(IA2-P2)-His成功转入BL21中,以可溶性的形式高效表达,该工作为进一步验证融合蛋白的生物学活性奠定了一定的基础。
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关 键 词: | 重组蛋白 发酵 纯化 鉴定 |
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