| 构建人csp-B核基质结合区克隆及其介导的反转录载体 |
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| 引用本文： | 咎玉玺,王俐,张俊河,王天云. 构建人csp-B核基质结合区克隆及其介导的反转录载体[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2010, 14(11). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.012 |
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| 作者姓名： | 咎玉玺 王俐 张俊河 王天云 |
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| 作者单位： | 新乡医学院生物化学与分子生物学教研室,河南省新乡市,453003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，河南省自然科学基金，河南省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | ![]()
背景:核基质结合区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列.大量实验表明,核基质结合区可以作为DNA复制的起始点或调控基因的转录,构建核基质结合区表达载体能提高外源基因表达水平,增强外源基因表达的稳定性及提高转化细胞稳定株的频率等.目的:通过克隆人基因组不同的核基质结合区片段,构建核基质结合区介导的包含氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的反转录病毒载体pLXSN-MAR,以探索核基质结合区对基因表达的影响.方法:开放性实验于2007-01/12在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成.自行构建含氯霉素乙酰转移酶报告基因的质粒PLXSN-CAT载体.TaqDNA聚合酶、T_4 DNA连接酶、DNA Marker、限制性内切酶BamH I、凝胶纯化试剂盒、质粒提取试剂盒均购于大连TaKaRa公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.以人基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增csp-B核基质结合区序列,克隆入反转录载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因.结果与结论:聚合酶链反应扩增的特异性片段长度为931 bp,以此构建的重组质粒命名为PLXSN-CAT-MAR,经BamH I酶切后显示5.9 kb和931 bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的人csp-B核基质结合区(Genbank序列号M62716)序列一致,证明人核基质结合区片段已成功克隆到了反转录载体PLXSN-CAT中.提示成功构建了PLXSN-CAT-MAR反转录表达载体.
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| 关 键 词： | 核基质结合区 基因克隆 反转录载体 载体构建 |
Cloning of human csp-B matrix attachment region sequence and construction of its retrovirus vector |
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| Zan Yu-xi,Wang Li,Zhang Jun-he,Wang Tian-yun. Cloning of human csp-B matrix attachment region sequence and construction of its retrovirus vector[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2010, 14(11). DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.11.012 |
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| Authors: | Zan Yu-xi Wang Li Zhang Jun-he Wang Tian-yun |
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| Affiliation: | Zan Yu-xi,Wang Li,Zhang Jun-he,Wang Tian-yunDepartment of Biochemistry , Molecular Biology,Xinxiang Medical College,Xinxiang 453003,Henan Province,China |
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| Abstract: | ![]()
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| Keywords: | csp-B |
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