利用TaqMan技术定量检测基因表达的引物探针设计

目的建立优化的实时荧光定量PCR的引物探针设计参数。方法设计引物和探针时的原则包括：①上、下游引物的融解温度（Tm值）应尽量相同或相差越小越好，以利于PCR退火温度的优化；②扩增区域应当跨越不同的外显子（在基因组DNA上至少一个以上的内含子），以利于区分基因组DNA扩增产物和cDNA扩增产物；③引物和探针的位置最好位于外显子和内含子交界处，以避免引物和探针与基因组DNA的结合；④扩增区域最好靠近基因的3’端，以减少不完全逆转录的影响。本次研究设计了实时荧光定量RT—PCR检测人甲胎蛋白mRNA的引物和探针，并提取临床肝癌组织标本中的RNA，检测其中甲胎蛋白的表达。绪果本次研究设计的实时荧光定量RT—PCR检测甲胎蛋白mRNA的引物和探针具有良好的特异性，可用于临床标本的检测。结论本次研究确定的原则对提高利用TaqMan技术定量检测目的基因结果的可靠性具有很好的指导意义。

Primer-probe design in quantitative analysis of gene expression using TaqMan technology