| hTERT基因荧光真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 梁光萍,罗向东,陈渝,张方,杨宗城. hTERT基因荧光真核表达载体的构建及表达[J]. 医学争鸣, 2003, 24(13): 1221-1223 |
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| 作者姓名： | 梁光萍 罗向东 陈渝 张方 杨宗城 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院烧伤研究所,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (30 0 0 0 0 72 ) |
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| 摘 要： | ![]()
目的：构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)正、反义荧光真核表达载体，并检测其在人胚胎成纤维细胞中的表达．方法：采用基因重组技术，将hTERT cDNA正向克隆到荧光真核表达载体pIRES2-EGFP中，NotI酶切鉴定；采用脂质法，将重组基因pIRES2-EGFP-hTERT转染入原代培养的人胚胎成纤维细胞；采用激光共聚焦显微镜、RT-PCR及Western blot检测hTERT在胚胎成纤维细胞中的表达．结果：经NotI酶切后，hTERT正义重组质粒被切成1．4kb和7．4kb2个片段，反义重组质粒为4．8kb和4．0kb2个片段，与理论预期长度相符；pIRER2-EGFP-hTERT重组基因经脂质法转染，G418筛选，获得一个阳性克隆，激光共聚焦显微镜下可见明显的绿色荧光，RT-PCR及Western blot可见hTERT mRNA转录及其蛋白的表达。结论：成功构建了h TERT正义荧光真核表达载体，并可在人胚胎成纤维细胞中表达。
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| 关 键 词： | 人端粒酶催化亚单位 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹 hTERT 基因表达 |
| 文章编号： | 1000-2790(2003)13-1221-03 |
| 修稿时间： | 2002-12-29 |
Construction and expression of eukaryotic fluorescent expressing vector of human telomerase reverse transcriptase in human embryonic fibroblasts |
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| LIANG Guang Ping,LUO Xiang Dong,CHEN Yu,ZHANG Fang,YANG Zong Cheng Institute of Burn Research,Southwest Hospital,Third Military Medical University,Chongqing ,China. Construction and expression of eukaryotic fluorescent expressing vector of human telomerase reverse transcriptase in human embryonic fibroblasts[J]. Negative, 2003, 24(13): 1221-1223 |
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| Authors: | LIANG Guang Ping LUO Xiang Dong CHEN Yu ZHANG Fang YANG Zong Cheng Institute of Burn Research Southwest Hospital Third Military Medical University Chongqing China |
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| Affiliation: | LIANG Guang Ping,LUO Xiang Dong,CHEN Yu,ZHANG Fang,YANG Zong Cheng Institute of Burn Research,Southwest Hospital,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China |
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| Abstract: | ![]()
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