| hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用 |
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| 引用本文： | 张志宏,曾永秋,税青林,田强,黄燕,赵小平.hTERT-siRNA表达载体的构建及对MCF-7细胞生长、端粒酶活性的抑制作用[J].解放军医学杂志,2007,32(6):561-564. |
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| 作者姓名： | 张志宏 曾永秋 税青林 田强 黄燕 赵小平 |
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| 作者单位： | 646000,四川泸州,泸州医学院医学生物学与遗传学教研室 |
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| 基金项目： | 四川省应用基础研究计划 |
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| 摘 要： | 目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径.方法 设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列TGTTCAGCGTGCTCAACTA,构建重组siRNA表达质粒pGenesil-hTERT,同时构建不针对任何基因的阴性对照重组pGenesiL-HK.两种重组质粒经酶切、电泳分析和测序鉴定后,用脂质体转染法分别转染乳腺癌MCF-7细胞,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测端粒酶活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 酶切电泳测序分析表明插入序列正确,重组质粒构建成功.转染pGenesil-hTERT的MCF-7细胞,凝胶电泳见端粒酶特征性条带明显减少,端粒酶活性受到明显抑制pGenesil-hTERT转染细胞后凋亡率较对照组明显升高(P＜0.01),且转染48h凋亡率最高,达54.7%±2.41%.结论 hTERT-siRNA可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性、促进细胞凋亡,此法有望应用于肿瘤基因治疗.
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| 关 键 词： | RNA干扰 siRNA表达载体 基因 hTERT 细胞凋亡 表达载体的构建 细胞生长 端粒酶活性 抑制作用 telomerase activity cells the growth effects inhibitory expression vector 肿瘤 促进细胞凋亡 对照组 细胞凋亡率 转染细胞 特征 凝胶电泳 重组质粒构建 插入序列 |
| 修稿时间： | 2007-03-202007-04-28 |
Construction of hTERT-siRNA expression vector and its inhibitory effects on the growth of MCF-7 cells and the activity of telomerase |
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| Zhang Zhihong, Zeng Yongqiu, Shui Qinglin,et al..Construction of hTERT-siRNA expression vector and its inhibitory effects on the growth of MCF-7 cells and the activity of telomerase[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2007,32(6):561-564. |
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| Authors: | Zhang Zhihong Zeng Yongqiu Shui Qinglin |
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| Institution: | Department of Biology and Genetics, Luzhou Medical College, Luzhou, Sichuan 646000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference siRNA expression vector genes hTERT apoptosis |
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