| 携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定 |
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| 引用本文： | 朱冰,杨建茹,江跃全,陈诗奉,付新平,张力平,汪天虎,程波.携带GALV.fus基因的重组单纯疱疹病毒的组装、扩增及鉴定[J].重庆医科大学学报,2010,35(10). |
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| 作者姓名： | 朱冰 杨建茹 江跃全 陈诗奉 付新平 张力平 汪天虎 程波 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第二医院心胸外科,重庆,400010;邯郸第六医院中心实验室,邯郸,056000 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，重庆市卫生局资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus Ⅰ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因质粒(HSV-UL38P-GALV.fus),无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus质粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治疗对照质粒(HSV-CMVP-EGFP),分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1.方法:扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒.重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法.Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达.结果:成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml,1×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml.受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达.结论:成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达.
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| 关 键 词： | Ⅰ型单纯疱疹病毒 长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白 基因重组 |
Packaging, amplification and identification of recombinant tumor-selective type Ⅰ herpes simplex virus vector containing GALV.fus gene |
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